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Perda e fragmentação de habitat: A maior ameaça à pantera da Flórida é a perda e fragmentação de habitat. O habitat da pantera da Flórida está sendo rapidamente desenvolvido para uso humano, como habitação, agricultura e turismo. Este processo cria barreiras que dificultam a movimentação das panteras e a localização de comida e parceiros.
Caça e caça furtiva: A pantera da Flórida já foi caçada até quase a extinção por causa de sua pele. Embora a caça à pantera da Flórida seja agora ilegal, a caça furtiva ainda ocorre. Os caçadores furtivos matam panteras por causa de seus pelos, dentes e garras, que são vendidos no mercado negro.
Doença: A pantera da Flórida também é suscetível a uma série de doenças, como leucemia felina, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e raiva. Estas doenças podem ser transmitidas de gatos domésticos para panteras, por isso é importante manter os gatos domésticos dentro de casa.
Colisões de veículos: A pantera da Flórida é frequentemente morta por veículos nas estradas. Este é um problema particular em áreas onde o habitat das panteras é fragmentado por estradas.
Competição com outros predadores: A pantera da Flórida também enfrenta a concorrência de outros predadores, como linces, coiotes e crocodilos. Esses predadores podem matar panteras ou competir com elas por comida.