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A via da glicólise pode ser dividida em 3 estágios/fases principais:
Fase preparatória: Neste estágio inicial, uma molécula de açúcar com 6 carbonos (geralmente glicose) é fosforilada duas vezes para formar frutose-1,6-bifosfato. Este processo requer a entrada de 2 moléculas de ATP e utiliza as enzimas hexoquinase e fosfofrutoquinase.
Fase de decote: Durante esta fase, a frutose-1,6-bifosfato é clivada em dois açúcares de 3 carbonos:gliceraldeído-3-fosfato (GAP) e fosfato de diidroxiacetona (DHAP). Essas 2 moléculas são interconversíveis e ambas podem prosseguir na via.
Fase de pagamento: Esta etapa final envolve a conversão de GAP e DHAP em piruvato, gerando ATP e NADH no processo. Esta etapa consiste em várias etapas enzimáticas, incluindo fosforilação em nível de substrato e reações de oxidação. Em última análise, 2 moléculas de piruvato são produzidas juntamente com um total de 4 moléculas de ATP e 2 moléculas de NADH para cada molécula de glicose que entra na glicólise.