Perda de habitat: A maior ameaça às panteras da Flórida é a destruição do seu habitat, que se deve principalmente ao desenvolvimento humano. A urbanização, a agricultura e as actividades mineiras fragmentaram e reduziram o tamanho do seu habitat natural, tornando-lhes difícil encontrar alimentos, parceiros e locais de criação adequados.
Caça e caça furtiva: Embora as panteras da Flórida sejam protegidas pela Lei de Espécies Ameaçadas, elas ainda enfrentam a ameaça da caça ilegal e furtiva. Algumas pessoas matam panteras por causa de suas peles ou em retaliação por supostas ameaças ao gado.
Doença: As panteras da Flórida são suscetíveis a várias doenças, incluindo leucemia felina, AIDS felina e cinomose canina. Essas doenças podem ser transmitidas de cães e gatos domésticos para panteras e podem causar graves problemas de saúde e até a morte.
Endogamia: Devido ao pequeno tamanho populacional das panteras da Flórida, a endogamia é uma ameaça significativa à sua diversidade genética. A endogamia pode levar à redução do sucesso reprodutivo, ao aumento da suscetibilidade a doenças e à diminuição geral da aptidão genética.
Colisões de veículos: As panteras da Flórida costumam cruzar estradas e rodovias em busca de comida e território, tornando-as vulneráveis a colisões com veículos. Essas colisões podem causar ferimentos graves ou morte às panteras.
Comércio ilegal: As panteras da Flórida às vezes são capturadas e vendidas ilegalmente como animais de estimação exóticos ou para uso em circos e outros locais de entretenimento. Este comércio representa uma séria ameaça à sobrevivência da espécie.